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蛋白質羰基含量檢測試劑盒說明書

點擊下載該文件    日期:2021/6/15 10:34:11

注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

產品內容:

提取液:液體25mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:粉劑0.1g×3 支,4℃保存。(使用前根據(jù)樣品數(shù),每支加1mL水溶解,每支為10 個樣品用量)

試劑二:液體 10mL×1 瓶,4℃避光保存。試劑三:液體 10mL×1 瓶,4℃保存。

試劑四:液體 25mL×1 瓶,4℃保存。

試劑五:根據(jù)測定樣品量,將乙酸乙酯和無水乙醇等體積混合。(自備)

試劑六:液體 50mL×1 瓶,4℃保存。

產品說明:

蛋白質羰基是多種氨基酸在蛋白質的氧化修飾過程中的早期標志,其含量高低表明蛋白質氧化損傷程度的大小,是衡量蛋白質氧化損傷的主要指標。

羰基與2,4-二硝基苯肼反應生成紅色2,4-二硝基苯腙,在370nm 處有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀器:

天平、恒溫水浴鍋、低溫離心機、漩渦震蕩儀、紫外分光光度計、1 mL 石英比色皿、蒸餾水, 無水乙醇和乙酸乙酯。

操作步驟:

一、樣品處理

組織樣品:稱取約0.1g 組織樣品,加入1mL提取液,充分勻漿后于4℃5000rpm 離心10min,取上清,加入0.1mL試劑一,室溫放置10min,4℃,12000rpm離心10min,取上清,然后取20μL測定蛋白含量,剩余的作為待測樣品。

三、計算公式
1、按蛋白濃度計算:
蛋白質羰基含量(μmol/mg prot)=(OD370測定管OD370空白管÷(ε×d)×V÷(Cpr×V樣品)
                               =(OD370測定管OD370空白管÷4.4÷Cpr;
2、按樣本鮮重計算:
蛋白質羰基含量(μmol/g鮮重)=(OD370測定管OD370空白管÷(ε×d)×V÷(W×V樣品÷V提取)
                             =(OD370測定管OD370空白管÷4÷W
ε:蛋白質羰基消光系數(shù),22mL•μmol-1•cm-1;d:比色皿光徑,1cm;V:加入試劑六體積,1mL;V樣品:加入樣本體積,0.2mL;V提�。杭尤胩崛∫杭霸噭┮惑w積,1.1mL;Cpr:樣本蛋白質濃度,mg/mL。W:樣品質量,g。
注意事項:
1.試劑一使用之前根據(jù)要測定的樣品數(shù)現(xiàn)配,配置好后4℃保存,若變?yōu)楹谏�,則不能使用。
2.試劑二見光易分解,反應需嚴格避光。

 

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