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葡萄糖含量檢測試劑盒說明書

點擊下載該文件    日期:2021/7/26 10:30:10

產品簡介:
葡萄糖不僅是細胞能量代謝的主要底物,而且其代謝中間產物是生物合成的重要底物。植物可

通過光合作用產生葡萄糖。就哺乳動物而言,葡萄糖不僅是大腦神經系統(tǒng)、肌肉、脂肪組織等的唯一能源,而且與還原性輔酶、乳糖和乳脂的合成密切相關。

葡萄糖氧化酶催化葡萄糖氧化成葡萄糖酸,并產生過氧化氫;過氧化物酶催化過氧化氫氧化 4-

氨基安替比林偶聯(lián)酚,生成有色化合物,在 505 nm 有特征吸收峰。
試驗中所需的儀器和試劑

可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。

產品內容:

試劑一:葡萄糖 9mg×1支,4℃保存;臨用前加入1ml蒸餾水充分溶解為50μmol/mL 葡萄糖溶液, 用蒸餾水稀釋為 0.5μmol/mL 葡萄糖溶液-20保存;

試劑二:液體 25mL×1 瓶,4℃保存; 試劑三:液體 25mL×1 瓶,4℃保存;

混合試劑的配制:使用前將試劑二和試劑三 1:1 等體積混合,用多少配多少。

操作步驟:

一、葡萄糖提�。�

1、組織的處理:稱取約 0.1g 樣本,加入 1mL 蒸餾水研磨成勻漿,置沸水浴中煮沸 10 分鐘(蓋緊,防止水分散失,冷卻后,8000g,常溫離心 10min,取上清液備用。

2、細菌或細胞處理:收集細菌或細胞到離心管內,離心后棄上清;按照細菌或細胞數量(104 :蒸餾水體積mL 500~10001 的比例(建議 500 萬細菌或細胞加入 1mL 蒸餾水), 超聲波破碎細菌或細胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3S,間隔 10S,重復 30 次),置沸水浴中煮沸 10 分鐘(蓋緊,防止水分散失),冷卻后,8000g25℃離心 10min,取上清液備用。

二、測定操作表:

1、分光光度計預熱 30min。波長調至 505nm,蒸餾水調零。

2、在 1.5mL 離心管中依次加入下列試劑:

試劑(μL

空白管

標準管

測定管

樣本

 

 

100

試劑一

 

100

 

蒸餾水

100

 

 

混合試劑

900

900

900

混勻,置 37℃(哺乳動物) 25℃(其它物種)水浴中,保溫 15min,于 505nm 波長處讀取吸光度。

1頁,共 2


葡萄糖含量計算:

1、按蛋白濃度計算

葡萄糖含量(µmol/mg prot)=C ×(A 測定管-A 空白管A標準管-A 空白管)×V ÷Cpr×V

樣)

0.5×(A 測定管-A 空白管A 標準管-A 空白管)÷Cpr

2、按樣本鮮重計算

葡萄糖含量µmol/g 鮮重)=C ×(A 測定管-A 空白管A 標準管-A 空白管) ×V ÷W÷V

樣總×V 樣)

0.5 ×(A 測定管-A 空白管A 標準管-A 空白管) ÷W

3、按細菌或細胞數量計算

葡萄糖含量(µmol/104 cell)=C ×(A 測定管-A 空白管A標準管-A 空白管) ×V ÷500÷V

樣總×V 樣)

0.001 ×(A 測定管-A 空白管A 標準管-A 空白管)

C:葡萄糖溶液濃度,0.5µmol/mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;V 樣:加入的樣本體積,

100µL=0.1mL;V 樣總:樣本總體積,1mL;W:樣本鮮重,g;500:細菌或細胞數量,500 萬。

4、若 A 測定管大于 1.5,稀釋后進行實驗。

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