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堿性磷酸酶染色液

點(diǎn)擊次數(shù):4438 日期:2019/6/12 14:38:34

堿性磷酸酶染色液
產(chǎn)品簡(jiǎn)介:
     堿性磷酸酶(Alkaline phosphatase,簡(jiǎn)稱ALP或AKP)為一類磷酸酯酶,廣泛分布于哺乳動(dòng)物組織內(nèi),其活性所需最適pH9.2~9.8。此酶主要存在于物質(zhì)交換活躍之處(細(xì)胞膜),如腸上皮和腎近曲小管的刷狀緣、附睪上皮之靜纖毛、肝的毛細(xì)膽管膜以及微動(dòng)脈和毛細(xì)血管動(dòng)脈部之內(nèi)皮,還見于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基復(fù)合體、吞飲小泡、腸上皮之溶酶體、中性粒細(xì)胞之中性顆粒以及平滑肌之細(xì)胞膜。
     堿性磷酸酶染色液(偶氮偶聯(lián)法)不是采用金屬沉淀法來顯示堿性磷酸酶活性,而是采用偶氮偶聯(lián)法(又稱同時(shí)偶聯(lián)法),其原理是在pH9.2~9.8的堿性條件下細(xì)胞內(nèi)堿性磷酸酶可使 AS-BI 磷酸鹽水解,釋放出磷酸與萘酚,后者與偶聯(lián)重氮鹽生成有色產(chǎn)物,定位于細(xì)胞質(zhì)中,該染液可用于血液、骨髓或細(xì)胞涂片、冰凍切片、梯度入水后的石蠟切片等的堿性磷酸酶染色, 堿性磷酸酶活性部位呈藍(lán)色,位于胞槳,結(jié)果較金屬鹽沉淀法可靠。
產(chǎn)品組成:
產(chǎn)品
3*10ml
 3*20ml
Storage
試劑(A):ALP固定液
100ml
20ml
RT 避光
試劑(B): ALP 孵育液
B1:AS-BI染色液
3*2ml
5*2ml
-20℃避光
B2:FBB染色液
5ml
10ml
4℃避光
臨用前,按 B1:B2=1:1 比例混合,即為 ALP 孵育液,即配即用。
試劑(C):核固紅染色液
10ml
20ml
4℃避光
使用說明書
         1份
自備材料:
1、載玻片、濕盒
2、顯微鏡
3、4%多聚甲醛固定液(備選)
操作步驟(僅供參考):
1、血液、骨髓或細(xì)胞涂片、冰凍切片、石蠟切片入ALP固定液固定3min(梯度入水后的石蠟切片無需固定),水洗。
2、滴加配制好的 ALP 孵育液,放入濕盒中避光孵育15~20min,水洗。
3、入核固紅染色液復(fù)染 3~5min。
4、水洗、鏡檢或甘油明膠封固后鏡檢。
(二) 貼壁培養(yǎng)細(xì)胞
1、取6孔板或其他容器培養(yǎng)的細(xì)胞,棄液,PBS清洗干凈。
2、加4%多聚甲醛固定10~20min,PBS 清洗。
3、滴加配制好的ALP孵育液,放入濕盒中避光孵育15~20min,PBS清洗。
4、入核固紅染色液復(fù)染0.5~3min。
5、PBS 清洗、鏡檢。
染色結(jié)果:
ALP 活性部位
藍(lán)色
細(xì)胞核
紅色(核固紅)或綠色(甲基綠)
 
血液、骨髓涂片結(jié)果判斷:
一般以積分報(bào)告結(jié)果,根據(jù)100個(gè)中性粒細(xì)胞陽性顆粒進(jìn)行 0~4+計(jì)分。
細(xì)胞分值
染色特點(diǎn)
0
無顆粒
1
稍有顆粒
2
中等程度顆粒
3
多數(shù)顆粒
4
充滿顆粒
臨床意義:
1、類白血病反應(yīng)積分明顯增高,未經(jīng)治療的慢性粒細(xì)胞白血病積分明顯減低。
2、急性細(xì)菌性感染積分明顯增高,病毒性感染積分多正常或減低。
3、再生障礙性貧血積分常增高,PNH、MDS 積分常減低。
注意事項(xiàng):
1、AS-BI 染色液易失效,應(yīng)避免反復(fù)凍融,臨用前低溫緩慢溶解,不可用溫水或熱水助溶。
2、ALP 孵育液易失效或降低陽性強(qiáng)度,即配即用,不宜久置。
3、血液或骨髓細(xì)胞涂片或其他樣本均應(yīng)新鮮,薄厚適宜,及時(shí)固定,否則會(huì)影響酶的活性。
4、培養(yǎng)細(xì)胞染色操作過程中,清洗、染色等步驟都應(yīng)輕微,以免損傷或丟失細(xì)胞。
5、培養(yǎng)細(xì)胞或細(xì)胞爬片染色建議采用 4%多聚甲醛固定液,ALP 固定液更適用于血液或骨
髓細(xì)胞圖片的固定,染色時(shí)間應(yīng)根據(jù)具體細(xì)胞特性而異。
有效期:12個(gè)月有效。

原創(chuàng)作者:青島捷世康生物科技有限公司

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