国产精品日韩欧美在线观看-午夜福利精品人妻久久潮喷-蜜臀av一区二区三区绯色-av中文字幕一区二区在线

捷世康生物是一家專注于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的“新星”企業(yè),產(chǎn)品及代理品牌產(chǎn)品范圍涵蓋了分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)等生命科學(xué)相關(guān)領(lǐng)域及相關(guān)實(shí)驗(yàn)室消耗品

品牌中心更多>>

熱賣產(chǎn)品

技術(shù)文獻(xiàn)

超氧陰離子(OFR)含量檢測(cè)試劑盒

點(diǎn)擊次數(shù):6591 日期:2021/6/21 14:46:46

超氧陰離子(OFR)含量檢測(cè)試劑盒
貨號(hào):H0142

規(guī)格:50T/48S

注意:正式測(cè)定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

產(chǎn)品內(nèi)容:

提取液:液體100mL×1瓶,4℃保存。

試劑一:液體32mL×1瓶,4℃保存。

試劑二:液體25mL×1瓶,4℃避光保存。

試劑三:液體25mL×1瓶,4℃避光保存。

試劑四:氯仿,自備。    

亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)品:液體1mL×1支,4℃保存。10μmol/mL亞硝酸鈉。

產(chǎn)品說明:

生物體內(nèi)超氧陰離子等活性氧具有免疫和信號(hào)傳導(dǎo)的作用,但積累過多時(shí)會(huì)對(duì)細(xì)胞膜及生物大分子產(chǎn)生破壞作用,導(dǎo)致機(jī)體細(xì)胞和組織代謝異常,從而引起多種疾病。

超氧陰離子與鹽酸羥胺反應(yīng)生成NO2-,NO2-在對(duì)氨基苯磺酰胺和萘乙二胺鹽酸鹽的作用下,生成紅色的偶氮化合物,在530nm有特征吸收峰,根據(jù)A530值可以計(jì)算樣品中O2-含量。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:天平、水浴鍋、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、1mL玻璃比色皿、氯仿和蒸餾水。

操作步驟

一、超氧陰離子提取

1.植物、動(dòng)物組織:稱取約0.1g樣本,加入提取液1mL,充分研磨,12000rpm,4℃,離心20min,取20μL上清測(cè)定蛋白含量,其余上清作為待測(cè)樣本。

2.血清或培養(yǎng)液:直接測(cè)定

二、測(cè)定操作表

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至530nm,蒸餾水調(diào)零。

2、標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備

稱取適量亞硝酸鈉標(biāo)準(zhǔn)液,首先16倍稀釋至 0.625µmol/mL,然后進(jìn)行倍比稀釋至 0.3125、0.15625、 0.078、0.039、0.0195、0.009765、0.0049、0.00244、0.0012、0.0006µmol/mL 梯度稀釋的標(biāo)準(zhǔn)溶液, 用0.3125、0.15625、0.078、0.039、0.0195、0.009765、0.00244、0.0006µmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)管做標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3、操作表

 

空白管

測(cè)定管

標(biāo)準(zhǔn)管

標(biāo)準(zhǔn)溶液(mL)

 

 

0.2

樣本(mL)

 

0.2

 

提取液(mL)

0.5

0.3

0.3

試劑一(mL)

0.4

0.4

0.4

混勻,37℃水浴20min

試劑二(mL)

0.3

0.3

0.3

試劑三(mL)

0.3

0.3

0.3

混勻,37℃水浴 20min

試劑四(mL)

0.5

0.5

0.5

混勻,8000rpm,25℃,離心 5min,小心吸取上層水相 1mL,蒸餾水調(diào)零,

1mL 玻璃比色皿,測(cè)定 A530。計(jì)算∆A 標(biāo)準(zhǔn)=A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管,∆A 樣品=A 測(cè)定管-A 空白管。每次實(shí)驗(yàn)空白管僅需做一管。

三、超氧陰離子含量計(jì)算公式

1.標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

∆A 標(biāo)準(zhǔn)為 y 軸,標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度為 x 軸,繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線 y=kx+b。

2.超氧陰離子含量的計(jì)算

∆A 樣品帶入方程得到 x 值(µmol/mL)

(1) 按照樣本鮮重計(jì)算

超氧陰離子含量(µmol/g鮮重)= 2x×V 樣本÷(V 樣本÷V 提取×W)=2x÷W。

超氧陰離子產(chǎn)生速率(µmol/ min/g鮮重)= 2x×V 樣本÷(V 樣本÷V 提取×W)÷T=0.1x÷W。

(2) 按照蛋白質(zhì)濃度計(jì)算

超氧陰離子含量(µmol/min/mg prot)= 2x×V 樣本÷(V樣本×Cpr)=2x÷Cpr。

超氧陰離子產(chǎn)生速率(µmol/min/mg prot)= 2x×V樣本÷(V 樣本×Cpr)÷T=0.1x÷Cpr。

(3) 按照血清或培養(yǎng)液體積計(jì)算

超氧陰離子含量(µmol/mL)= 2x

超氧陰離子產(chǎn)生速率(µmol/min/mL)= 2x÷T=0.1x。

V 樣本:參與反應(yīng)樣本體積,0.2mL;V提�。禾崛∵^程中加入的提取液體積,1mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣品鮮重,g;T:反應(yīng)時(shí)間,20min。

超氧陰離子(OFR)含量檢測(cè)試劑盒注意事項(xiàng):

1、OD值大于1.0,樣品適當(dāng)稀釋再測(cè)定,注意計(jì)算公式里乘以稀釋倍數(shù)。

2、樣品制備好之后,立刻進(jìn)行測(cè)定,請(qǐng)勿將樣品進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的低溫保存,以免影響測(cè)定結(jié)果。

3、試劑四有一定的毒性,請(qǐng)操作時(shí)做好防護(hù)措施。

原創(chuàng)作者:青島捷世康生物科技有限公司

掃一掃,關(guān)注手機(jī)網(wǎng)站!!!

收縮
請(qǐng)掃一掃!