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土壤多酚氧化酶(Solid-Polyphenol oxidase,S-PPO)試劑盒說明書

點(diǎn)擊次數(shù):2021 日期:2018/11/7 16:11:02

土壤多酚氧化酶(Solid-Polyphenol oxidase,S-PPO)試劑盒說明書

分光光度法 50 /48 

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義:

S-PPO 主要來源于土壤微生物、植物根系分泌物及動(dòng)植物殘?bào)w分解釋放,催化土壤中芳香族

化合物氧化成醌,醌與土壤中蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、礦物等物質(zhì)反應(yīng)生成有機(jī)質(zhì)和色素,

完成土壤芳香族化合物循環(huán),用于土壤環(huán)境修復(fù)。

測(cè)定原理:

S-PPO 能夠催化鄰苯三酚產(chǎn)生有色物質(zhì),后者在430nm 有特征光吸收。

自備用品

可見分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、乙醚100mL(不

允許快遞)、蒸餾水。

試劑組成和配制

試劑一:粉劑×2 瓶,4℃保存;臨用前取一瓶加入15mL 蒸餾水,用不完的試劑4保存一周;

試劑二:液體12mL×1 瓶,4保存;

試劑三:乙醚50mL×2 瓶,4保存;(自備)

樣品處理

新鮮土樣自然風(fēng)干或37 度烘箱風(fēng)干,過30~50 目篩。

測(cè)定步驟

試劑名稱 測(cè)定管

風(fēng)干土樣(g 0.05

試劑一(μL 500

振蕩混勻,30恒溫培養(yǎng)1 h

試劑二(μL 200

試劑三(μL 1750

振蕩數(shù)次,室溫靜置30min,用蒸餾水調(diào)零,取1mL 上層液于430nm 處測(cè)定吸光值A。

(注意:1、因乙醚粘度小,易掉液,吸取前需先將槍頭在上層液里潤(rùn)洗 2~3 次,再轉(zhuǎn)移測(cè)

定;2、乙醚易揮發(fā),轉(zhuǎn)移到 96 孔板后立即測(cè)定,最好一個(gè)一個(gè)測(cè)定)。

S-PPO 活力計(jì)算

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為y = 8.97x -0.003x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(mg/mL),y 為吸光值A

單位的定義:每天每g 土樣中產(chǎn)生1mg 紫色沒食子素定義為一個(gè)酶活力單位。

S-PPO 活力(mg/d /g 土樣)=(A+0.003) ÷8.97×V 反總÷W÷T=131×(A+0.003)

T:反應(yīng)時(shí)間,1h=1/24d; V 反總:反應(yīng)體系總體積2.45mLW:樣本質(zhì)量,0.05g

原創(chuàng)作者:青島捷世康生物科技有限公司

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