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人α-平滑肌肌動(dòng)蛋白(α-SMA)試劑盒(ELISA)

點(diǎn)擊次數(shù):1586 日期:2017/1/18 14:34:30

 
 
本試劑盒用于體外定量檢測(cè)血清、血漿、組織、細(xì)胞上清及相關(guān)液體樣本中人α-平滑肌肌動(dòng)蛋白α-SMA)的含量。
有效期:6個(gè)月
保存條件:2-8℃
 
 
實(shí)驗(yàn)原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)。往預(yù)先包人α-平滑肌肌動(dòng)蛋白α-SMA)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測(cè)抗體,經(jīng)過(guò)溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過(guò)氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人α-平滑肌肌動(dòng)蛋白α-SMA)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD 值),計(jì)算樣品濃度。
 
樣本處理及要求
1.  血清:全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)夜后于1000g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
2.  血漿:可用EDTA或肝素作為抗凝劑,標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8°C 1000g離心20分鐘,或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
3.  細(xì)胞培養(yǎng)物上清或其它生物標(biāo)本:1000g離心20分鐘,取上清即可檢測(cè),或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
注:標(biāo)本溶血會(huì)影響最后檢測(cè)結(jié)果,因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。

需要而未提供的試劑和器材
1. 酶標(biāo)儀(450nm)
2. 高精度加樣器及槍頭:0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL
3. 37℃恒溫箱
4. 蒸餾水或去離子水
 
試劑盒組成
名稱
96孔配置
48孔配置
備注
微孔酶標(biāo)板
8孔×12
8孔×6
無(wú)
標(biāo)準(zhǔn)品
0.3mL*6管
0.3mL*6管
無(wú)
樣本稀釋液
6mL
3mL
無(wú)
檢測(cè)抗體-HRP
10mL
5mL
無(wú)
20×洗滌緩沖液
25mL
15mL
按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行稀釋
底物A
6mL
3mL
無(wú)
底物B
6mL
3mL
無(wú)
終止液
6mL
3mL
無(wú)
封板膜
2張
2張
無(wú)
說(shuō)明書(shū)
1份
1份
無(wú)
自封袋
1個(gè)
1個(gè)
無(wú)
1.  標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:400、200、100、50、25、0 pg/mL
2.  經(jīng)過(guò)大量正常標(biāo)本檢驗(yàn),標(biāo)本的正常濃度值均在試劑盒提供的檢測(cè)范圍內(nèi),實(shí)驗(yàn)過(guò)程中直接取50μL樣本上樣即可。當(dāng)有部分樣本值超過(guò)最大標(biāo)準(zhǔn)品濃度時(shí),可用樣本稀釋液將標(biāo)本進(jìn)行適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
 
注意事項(xiàng)
1. 嚴(yán)格按照規(guī)定的時(shí)間和溫度進(jìn)行溫育以保證準(zhǔn)確結(jié)果。所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫20-25℃。使用后立即冷藏保存試劑。
2. 洗板不正確可以導(dǎo)致不準(zhǔn)確的結(jié)果。在加入底物前確保盡量吸干孔內(nèi)液體。溫育過(guò)程中不要讓微孔干燥掉。
3. 消除板底殘留的液體和手指印,否則影響OD值。
4. 底物顯色液應(yīng)呈無(wú)色或很淺的顏色,已經(jīng)變藍(lán)的底物液不能使用。
5. 避免試劑和標(biāo)本的交叉污染以免造成錯(cuò)誤結(jié)果。
6. 在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
7. 平衡至室溫后再打開(kāi)密封袋以防水滴凝聚在冷板條上。
8. 任何反應(yīng)試劑不能接觸漂白溶劑或漂白溶劑所散發(fā)的強(qiáng)烈氣體。任何漂白成分都會(huì)破壞試劑盒中反應(yīng)試劑的生物活性。
9. 不能使用過(guò)期產(chǎn)品。
10. 如果可能傳播疾病,所有的樣品都應(yīng)管理好,按照規(guī)定的程序處理樣品和檢測(cè)裝置
 
試劑準(zhǔn)備
試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡后方可使用。
20×洗滌緩沖液的稀釋:蒸餾水按1:20稀釋,即1份20×洗滌緩沖液加19份蒸餾水。
 
操作步驟
1.  從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條,剩余板條用自封袋密封放回4℃。
2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
3.  樣本孔待測(cè)樣本50μL;空白孔不加。
4.  除空白孔外,標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL,用封板膜封住反應(yīng)孔,37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。
5.  棄去液體,吸水紙上拍干,每孔加滿洗滌液(350μL,靜置1min,甩去洗滌液,吸水紙上拍干,如此重復(fù)洗板5次(也可用洗板機(jī)洗板)。
6.  每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7.  每孔加入終止液50μL,15min內(nèi),在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。
 
實(shí)驗(yàn)結(jié)果計(jì)算
所測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的OD值為橫坐標(biāo),標(biāo)準(zhǔn)品的濃度值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上或用相關(guān)軟件繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,并得到直線回歸方程,將樣品的OD值代入方程,計(jì)算出樣品濃度。
 
試劑盒性能
1.  檢測(cè)范圍12.5 pg/mL  400 pg/mL
2.  靈敏度:最低檢測(cè)濃度小于1.0 pg/mL。
3.  特異性:不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類似物交叉反應(yīng)。
4.  重復(fù)性:板內(nèi)變異系數(shù)小于10% ,板間變異系數(shù)小于15% 

原創(chuàng)作者:青島捷世康生物科技有限公司

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