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苯基-瓊脂糖凝膠 6FF

點(diǎn)擊次數(shù):1609 日期:2017/4/5 13:35:31

苯基-瓊脂糖凝膠 6FF是將苯基鍵合在6FF瓊脂糖微球上形成的一種可利用疏水相互作用來(lái)實(shí)現(xiàn)目標(biāo)產(chǎn)品純化分離的疏水類介質(zhì)。用于生物大分子和乙肝疫苗的純化分離。
1 外觀
本品為白色球狀凝膠,無(wú)嗅、無(wú)味、無(wú)肉眼可見(jiàn)雜質(zhì)。
2 理化指標(biāo)
項(xiàng) 目
指 標(biāo)
配基
R-OCH2-CH(OH)-CH2-O-C6H5
基質(zhì)
6% 交聯(lián)瓊脂糖
形狀
球形  
粒徑
45~165 μm
蛋白質(zhì)吸附容量(HSA)
36mg/ml(高);20mg/ml(低)
最高流速(25)
100KPa下300 cm/h*
耐壓
0.15 MPa
工作溫度
4~40
pH適用范圍
2~14短時(shí)間 ,在位清洗;3~13長(zhǎng)時(shí)間
化學(xué)穩(wěn)定性
以下溶液中穩(wěn)定 
1mol/L NaOH;70% EtOH30%異丙醇;0.5%SDS;6mol/L鹽酸胍;8mol/L尿素;3 mol/L(NH4)2SO4
      *柱子:內(nèi)徑50mm、柱長(zhǎng)30cm。柱床高15cm,25流動(dòng)相為0.1mol/LNaCl。
3 包裝
產(chǎn)品以無(wú)菌試劑瓶密封包裝,外貼標(biāo)簽,注明品名、體積、顆粒大小、應(yīng)用、生產(chǎn)單位等內(nèi)容。所選用的包裝應(yīng)有利于保證產(chǎn)品質(zhì)量、方便運(yùn)輸和貯存。
4 運(yùn)輸
運(yùn)輸中應(yīng)避免日曬、雨淋、重壓,嚴(yán)禁與有毒、有害物品混運(yùn)。
5 貯存
產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4~30℃(保存溶液為20% 乙醇+0.1M醋酸鈉),通風(fēng)、干燥、清潔的地方。不能冷凍。
用過(guò)的柱子貯存在4℃(20% 乙醇)。
6 保質(zhì)期:
5年。
7 應(yīng)用
苯基-瓊脂糖凝膠 6FF是一種疏水層析介質(zhì),利用樣品中組分疏水性的不同進(jìn)行分離。用于生物大分子的純化分離。
下面簡(jiǎn)要介紹介質(zhì)的使用過(guò)程。
7.1 裝柱
(1)讓所有的材料和試劑達(dá)到室溫。配制初始緩沖液(平衡液)和洗脫緩沖液。
(2)根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠,清洗掉20%乙醇,抽干,用初始緩沖液(按凝膠:緩沖液=3:1的比例)配成勻漿。
(3)將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤(rùn)濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務(wù)必使底端無(wú)氣泡。
(4)用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開(kāi)柱子出液口,使凝膠在柱內(nèi)自由沉降,連結(jié)好柱子頂端柱頭。
(5)打開(kāi)蠕動(dòng)泵,讓緩沖液用使用時(shí)流速的1.33倍的流速流過(guò),使柱床穩(wěn)定。用2~3倍柱體積的緩沖液平衡柱子。
7.2 平衡
讓平衡緩沖液以一定流速流過(guò)柱子,到流出液電導(dǎo)和pH不變。平衡緩沖液一般是高鹽濃度的緩沖液,如0.02~0.05mol/L的PBS加1~2.5mol/L(NH4)2SO4等。
7.3 上樣
(1)樣品用平衡液配制,渾濁的樣品要離心和過(guò)濾后上樣。
(2)一般情況是讓目標(biāo)產(chǎn)品結(jié)合在柱子上,用平衡液洗去雜質(zhì),再選擇一種洗脫液洗下目標(biāo)產(chǎn)品。
(3)介質(zhì)對(duì)樣品組分吸附的程度取決于樣品的疏水性質(zhì)、流動(dòng)相的離子強(qiáng)度和溫度。鹽濃度大、溫度高或樣品組分疏水性強(qiáng),介質(zhì)對(duì)組分吸附牢。
7.4 洗脫
疏水介質(zhì)可用減小鹽濃度進(jìn)行洗脫。加表面活性劑或有機(jī)溶劑可加強(qiáng)洗脫。最常用的洗脫液是低鹽濃度緩沖液,如0.02~0.05mol/L的PBS。
7.5 再生
一般用低鹽濃度的緩沖液洗,洗10倍以上柱體積,接著用結(jié)合蛋白的平衡液洗到平衡,可再次使用。
若有失活蛋白質(zhì)或脂類物質(zhì)在再生時(shí)洗不掉,可用在位清洗(CIP)除去。
7.6 在位清洗
(1)對(duì)于以離子鍵結(jié)合上去的蛋白,可以用2M Nacl去除。
(2)對(duì)沉淀蛋白、對(duì)以疏水性結(jié)合的蛋白或脂類,可用1M NaOH 去除。
(3)對(duì)強(qiáng)疏水性結(jié)合的蛋白、脂類等,用4~10倍柱體積的70%乙醇或30%異丙醇清洗,但要注意有機(jī)溶劑的濃度以梯度的方式逐漸增加,否則容易產(chǎn)生氣泡。
清洗完畢后,用至少3倍緩沖液平衡柱子。
7.7 注意
在裝柱、使用和保存柱子的時(shí)候,要避免柱子流干,氣泡進(jìn)入。
7.8 去熱源
用0.5M的氫氧化鈉清洗柱子5~6小時(shí)或用0.1M的氫氧化鈉24小時(shí)�;蛴靡韵路椒ú襟E去除:
(1)2倍柱體積的70%乙醇;
(2)2倍柱體積50mM Tris-Hcl pH7.5
(3)1倍柱體積4M尿素;
(4)3倍柱體積的Tris緩沖液+0.1M Nacl
上緩沖液都在無(wú)熱源的雙蒸水中配制。
7.9 消毒
用0.5~1M NaOH室溫下洗8~10倍柱體積,初始緩沖液平衡柱子。

原創(chuàng)作者:青島捷世康生物科技有限公司

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