国产精品日韩欧美在线观看-午夜福利精品人妻久久潮喷-蜜臀av一区二区三区绯色-av中文字幕一区二区在线

捷世康生物是一家專注于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的“新星”企業(yè),產(chǎn)品及代理品牌產(chǎn)品范圍涵蓋了分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)等生命科學(xué)相關(guān)領(lǐng)域及相關(guān)實(shí)驗(yàn)室消耗品

品牌中心

熱賣產(chǎn)品

企業(yè)動(dòng)態(tài)

乙酰輔酶 A含量測定試劑盒說明書

點(diǎn)擊次數(shù):1055 日期:2016/9/19 8:46:01

乙酰輔酶 AAcetyl-CoA)含量測定試劑盒說明書
 
分光光度法 25 管/24 樣
 
測定意義
 
乙酰輔酶 A 廣泛存在于動(dòng)物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中。是生物體能源物質(zhì)代謝過程中產(chǎn)生的一種重要的中間代謝產(chǎn)物。在體內(nèi)能源物質(zhì)代謝中是一個(gè)樞紐性的物質(zhì)。糖、脂肪、蛋白質(zhì)三大營養(yǎng)物質(zhì)通過乙酰輔酶 A 匯聚成一條共同的代謝通路-三羧酸循環(huán)和氧化磷酸化,經(jīng)過這條通路徹底氧化生成二氧化碳和水,釋放能量用于 ATP 合成。此外,乙酰輔酶 A 是合成脂肪酸,酮體,膽固醇及其衍生物等生理活性物質(zhì)的前體物質(zhì)。
測定原理
 
蘋果酸脫氫酶可催化蘋果酸和 NAD 生成草酰乙酸和 NADH。檸檬酸合酶可催化乙酰輔酶 A 和草酰乙酸生成檸檬酸和輔酶 A。利用蘋果酸脫氫酶和檸檬酸合酶的偶聯(lián)反應(yīng),乙酰輔酶 A 含量和 NADH 的生成速率成正比,340nm 下吸光值的上升速率反應(yīng)了乙酰輔酶 A 含量的高低。
需自備的儀器和用品
 
紫外分光光度計(jì)、水浴鍋、臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑的組成和配制
 
試劑一:液體×1 瓶,4℃保存。
 
試劑二:粉劑×1 支,-20℃保存。臨用前加入 250μL 試劑五充分溶解備用。試劑三:液體×1 支,4℃保存。臨用前加入 250μL 試劑五充分溶解備用。試劑四:粉劑×1 瓶,-20℃保存。臨用前加入 22.5μL 試劑五充分溶解備用。試劑五:液體×1 瓶,4℃保存。
 
工作液的配制:臨用前請根據(jù)擬用工作液體積(樣本數(shù)×0.92 m L),將試劑二、三和四按照 1:1:90 的比例混合,或者直接把試劑二和試劑三加入到試劑四中混勻(可以測定 24 樣);加樣前置 37℃(哺乳動(dòng)物)或 25℃(其它物種)水浴鍋中預(yù)熱 30 min。
 
乙酰輔酶 A 的提取
 
1、細(xì)菌或培養(yǎng)細(xì)胞:先收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):試劑一體積(mL)為 500~10001 的

比例(建議
500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入 1mL 試劑一),超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(冰浴,功率 20%或 200W,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30 次); 8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
 
2、組織:按照組織質(zhì)量(g):試劑一體積(mL) 15~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 試劑一),進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min,取上清,置冰上待測。
測定步驟
 
1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min,用蒸餾水于 340nm 處調(diào)零。
 
2、 920μL 工作液和 100μL 樣本至 1mL 石英比色皿,混勻,立即記錄 340nm  20s 的吸光值 A1 和 80s 時(shí)的吸光值 A2,計(jì)算ΔA=A2-A1。
3、乙酰輔酶 A 含量計(jì)算
 
標(biāo)準(zhǔn)條件下測定的回歸方程為 y = 1640x + 0.012;x 為吸光值,y 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(nmol/mL)。注意:本試劑盒最低檢測限為 1.6nmol/mL。
 
1)按照蛋白濃度計(jì)算
 
乙酰輔酶A 含量(nmol/mg prot)=[(1640×ΔA0.012) ×V1]÷(V1×Cpr)=(1640×ΔA0.012) ÷Cpr
 
需要另外測定,建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒。(2)按照樣本質(zhì)量計(jì)算
乙酰輔酶 A 含量(nmol/g 鮮重)=[(1640×ΔA0.012) ×V1]÷(W×V1÷V2)=(1640×ΔA0.012)
 
÷W
 
(3 ) 按照細(xì)菌或細(xì)胞密度計(jì)算:
 
乙酰輔酶 A 含量(nmol/104)=[(1640×ΔA0.012)×V1]÷(500×V1÷V2)=(1640×ΔA0.012)÷500 V1:加入反應(yīng)體系中樣本體積,0.1mL;V2

加入提取液體積,
1 mL;Cpr:樣本蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;W:樣本質(zhì)量,g;500:細(xì)胞或細(xì)菌總數(shù),500 萬。
 

掃一掃,關(guān)注手機(jī)網(wǎng)站!!!

收縮
請掃一掃!