抗壞血酸過氧化物酶（APX）活性檢測試劑盒

貨號：H0082 

規(guī)格：50T/48S

注意：正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：液體90mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加入5mL 雙蒸水充分溶解；

試劑三：液體5mL×1 瓶，4℃保存。

產(chǎn)品說明：

APX 是植物清除活性氧的重要抗氧化酶之一，也是抗壞血酸代謝的關(guān)鍵酶之一。APX 具有多種同功酶，分別定位于葉綠體、胞質(zhì)、線粒體、過氧化物和乙醛酸體，以及過氧化體和類囊體膜上。APX 催化 H₂O₂ 氧化 AsA，是植物 AsA 的主要消耗者。APX 的活性直接影響到 AsA  的含量，在脅迫和解脅迫條件下，APX 與 AsA 具有一定的負(fù)相關(guān)性。

APX 催化H₂O₂ 氧化AsA，通過測定AsA 的氧化速率，可計(jì)算得APX 活力。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：

低溫離心機(jī)、紫外分光光度計(jì)、1mL 石英比色皿、移液槍、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、粗酶液提取 ：

按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入1mL 試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。13000g，4℃離心 20min，取上清置冰上待測。

二、測定操作表：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30 min 以上，調(diào)節(jié)波長到290nm，用蒸餾水調(diào)零。

2. 試劑一在25℃中預(yù)熱30min以上。

3. 空白管：依次在1mL石英比色皿中加入100μL 蒸餾水、700μL預(yù)熱的試劑一、100μL試劑二和

100μL試劑三，迅速混勻后在290nm 測定10 s 和130 s 光吸收A1 和A2，△A 空白管=A1-A2。

4. 測定管：依次在 1mL 石英比色皿中加入100μL 上清液、700μL 預(yù)熱的試劑一、100μL 試劑二和

100μL 試劑三，迅速混勻后在 290nm 測定 10 s 和 130 s 光吸收 A3 和 A4，△A 測定管=A3-A4。三、APX 活力計(jì)算：

(1) 按樣本蛋白濃度計(jì)算

活性單位定義：每毫克蛋白每分鐘氧化 1μmol AsA 為1U。

APX(U/mg prot) = (△A 測定管-△A 空白管)÷(ε×d）×V 反總×10⁶÷(Cpr×V 樣)÷T

=1.79×(△A 測定管-△A 空白管) ÷ Cpr

ε：AsA 在 290nm 處摩爾吸光系數(shù)為 2.8×10³L/mol/cm；d：比色皿光徑（cm），1 cm；V 反總：反應(yīng)體系總體積（L），1000μL=1×10^-3 L；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/mL），需要另外測定，建議使用本公司 BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（mL）， 100μL=0.1 ml；T：催化反應(yīng)時(shí)間（min），2min。

（2）按樣本質(zhì)量計(jì)算

單位的定義：每 g 組織每分鐘氧化 1μmol AsA 為 1U。

APX(U/g ) = (△A 測定管-△A 空白管)÷(ε×d）×V 反總×10⁶÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T

=1.79×(△A 測定管-△A 空白管) ÷W

ε：AsA 在 290nm 處摩爾吸光系數(shù)為 2.8×10³ L/mol/cm；d：比色皿光徑（cm），1 cm；V 反總：反應(yīng)體系總體積（L），1000μL=1×10^-3 L；10⁶：1mol=1×10⁶μmol；V 樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積

（mL），100μL=0.1 mL；V 樣總：加入試劑一體積，1mL；W，樣本質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時(shí)間（min），

2min。

原創(chuàng)作者：青島捷世康生物科技有限公司

標(biāo)簽：抗壞血酸過氧化物酶（APX）活性檢測試劑盒 抗壞血酸過氧化物酶活性檢測試劑盒 抗壞血酸過氧化物酶測試盒 APX檢測試劑盒 

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