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捷世康生物是一家專注于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域的“新星”企業(yè),產(chǎn)品及代理品牌產(chǎn)品范圍涵蓋了分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)免疫學(xué)、生物化學(xué)等生命科學(xué)相關(guān)領(lǐng)域及相關(guān)實(shí)驗(yàn)室消耗品

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組織AMPK 激酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒

產(chǎn)品型號(hào):20T

產(chǎn)品產(chǎn)地:中國(guó)

采購(gòu)熱度:2444

產(chǎn)品價(jià)格: 1

簡(jiǎn)介內(nèi)容:組織AMPK激酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
訂購(gòu)熱線:400 9025 885

組織AMPK 激酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒

 組織AMPK激酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
規(guī)格:20T

組織AMPK激酶活性比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在通過(guò)多肽底物受到AMPK 磷酸化后,進(jìn)而由丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶連續(xù)循環(huán)法反應(yīng)系統(tǒng),測(cè)定產(chǎn)生 ADP過(guò)程中,伴隨的還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)的氧化反應(yīng),即采用比色法測(cè)定其氧化后吸光峰值的變化,以分析組織裂解樣品中 AMPK活性的權(quán)威而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種組織裂解萃取液樣品(動(dòng)物、人體)、部分或完全純化酶樣品中AMPK激酶的定量檢測(cè),以及抑制劑和激活劑的篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定,高度敏感。
 
技術(shù)背景
 
5’AMP活化蛋白激酶(5’AMP activated protein kinase;AMPK)屬于絲氨酸/蘇氨酸激酶(serine/threonine protein kinase)家屬成員之一。其為從酵母到人體高度進(jìn)化保留的激酶復(fù)合物,由3個(gè)亞體,α、β、γ構(gòu)成:其中γ亞體有4個(gè)胱硫醚β合酶(cystathione beta synthase;CBS)結(jié)構(gòu)域,又稱為巴特曼(Bateman)結(jié)構(gòu)域,以探測(cè)AMP和ATP的比例;α亞體含有催化結(jié)構(gòu)域,一旦收到AMPKK或LKB1/MO25/STRAD 復(fù)合物催化的磷酸化后,AMPK被激活。所有亞體都有不同異構(gòu)體形式,包括α1、α2、β1、β2、γ1、γ2 和γ3。其功能在于保持細(xì)胞能量?jī)?nèi)環(huán)境恒定:促進(jìn)脂肪酸β氧化、抑制膽固醇合成、促進(jìn)肌肉葡萄糖吸收和調(diào)節(jié)胰島素分泌等。AMPK在肝臟、腦和肌肉組織中高度表達(dá)。其磷酸化目標(biāo)序列為 LKKLTRASFFGQ。基于底物L(fēng)KKLTRASFFGQ,在ATP的存在下,受到5’AMP活化蛋白激酶的磷酸化,獲得產(chǎn)物磷酸化多肽,進(jìn)而通過(guò)丙酮酸激酶(pyruvate kinase;PK)和乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase;LDH)反應(yīng)系統(tǒng)中,還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide;NADH)轉(zhuǎn)化為氧化型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide;NAD),其峰值的變化(340nm),來(lái)定量分析5’AMP活化蛋白激酶的活性。其反應(yīng)方式為:
 
產(chǎn)品內(nèi)容
 清理液(Reagent A)毫升
 裂解液(Reagent B)毫升
 緩沖液(Reagent C)毫升
 酶促液(Reagent D)微升
 反應(yīng)液(Reagent E)微升
 底物液(Reagent F)微升
 陰性液(Reagent G)微升
產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)1 份
保存方式
 
保存 清理液(Reagent A)在 4℃冰箱里;其余的保存在-20℃冰箱里,嚴(yán)格避免光照和反復(fù)凍融;有效保證 6 月
 
用戶自備
 
AMPK激酶:用于抑制劑篩選
1.5毫升離心管:用于樣品保存的容器
15毫升錐形離心管:用于樣品處理的容器
(微型)臺(tái)式離心機(jī):用于細(xì)胞預(yù)處理
比色皿或酶標(biāo)板:用于比色分析操作的容器分光光度儀或酶標(biāo)儀:用于樣品比色分析
 
 組織AMPK 激酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)步驟
 
一、 待測(cè)樣品準(zhǔn)備
 
1.手術(shù)取出動(dòng)物組織,并秤重 500 毫克組織重量
2.(選擇步驟)放進(jìn)預(yù)冷的 15 毫升錐形離心管
3.(選擇步驟)加入毫升  清理液(Reagent A)清洗
4.(選擇步驟)抽去清理液
5.移入到一個(gè)液氮凍存管
6.即刻放進(jìn)液氮罐過(guò)夜
7.次日從液氮罐里取出,即刻(最快速度)用研磨棒碾碎組織成粉末狀(注意:切莫使組織凍融)
8.放進(jìn)一個(gè) 15 毫升錐形離心管
9.加入置于冰槽里的微升  裂解液(Reagent B) 10.強(qiáng)力渦旋震蕩 30 秒,充分混勻
11.放進(jìn)冰槽里孵育 30 分鐘,期間每 10 分鐘強(qiáng)力渦旋震蕩 30 秒(注意:如需暫時(shí)停止,放進(jìn)-70℃冰箱里儲(chǔ)存?zhèn)溆茫?/div>
12.即刻放進(jìn) 4℃臺(tái)式離心機(jī)離心 10 分鐘,速度為 10000g
13.小心移取上清液到新的無(wú)菌的 1.5 毫升離心管
14.移取 10 微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)(注意:建議使用  Bradford 蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-(GMS30030.1)
15.放進(jìn)-70℃的冰箱里保存或置于冰槽里備用
二、測(cè)定準(zhǔn)備
1.準(zhǔn)備好待測(cè)樣品(例如細(xì)胞裂解懸液等),置于冰槽里
2.設(shè)定好分光光度儀(溫度為 30℃):波長(zhǎng)為340nm,間隔1分鐘,讀數(shù) 6次(共5分鐘),并置零
三、 背景對(duì)照測(cè)定
 
1.移取微升  緩沖液(Reagent C)到新的比色皿
2.加入微升  酶促液(Reagent D)
3.加入微升  陰性液(Reagent G)
4.放進(jìn) 30℃培養(yǎng)箱里靜置 2 分鐘
5.(選擇步驟)放進(jìn)分光光度儀,置零
6.(選擇步驟)取出比色皿
 
7.加入微升  反應(yīng)液(Reagent E)
8.加入微升  底物液(Reagent F)
9.上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3 秒之內(nèi))
10.即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為背景空對(duì)照:340 波長(zhǎng)讀數(shù) 0 分鐘 -340 波長(zhǎng)讀數(shù) 5 分鐘
 
四、 樣品測(cè)定
 
 
1.移取微升  緩沖液(Reagent C)到新的比色皿
2.加入微升  酶促液(Reagent D)
3.加入 5 微升待測(cè)樣品(注意:50 微克細(xì)胞裂解懸液蛋白;樣品須溶解)
4.放進(jìn) 30℃培養(yǎng)箱里靜置 2 分鐘
5.(選擇步驟)放進(jìn)分光光度儀,置零
6.(選擇步驟)取出比色皿
7.加入微升  反應(yīng)液(Reagent E)
8.加入升  底物液(Reagent F)
9.上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在 3秒之內(nèi))
10.即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為樣品讀數(shù):340 波長(zhǎng)讀數(shù) 0 分鐘 -340 波長(zhǎng)讀數(shù) 5 分鐘
 
五、 計(jì)算樣品活性
 
單位=微摩爾 NADH/分鐘六、酶標(biāo)板測(cè)定
1.在 96 孔酶標(biāo)板上做好相應(yīng)標(biāo)記:背景對(duì)照和樣品
2.分別移取微升  緩沖液(Reagent C)到 96 孔板中
3.分別加入微升  酶促液(Reagent D)
4.分別加入 5 微升  陰性液(Reagent G)或待測(cè)樣品(50 微克細(xì)胞裂解懸液蛋白)到相應(yīng)孔中(注意:樣品須清澈)
5.輕輕搖動(dòng) 96 孔酶標(biāo)板
6.在 30℃溫度下孵育 2 分鐘
7.分別加入微升  反應(yīng)液(Reagent E)
8.分別加入微升  底物液(Reagent F)
9.輕輕搖動(dòng)酶標(biāo)板
10.即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀檢測(cè):0 分鐘讀數(shù)和 5 分鐘讀數(shù)
11.活性計(jì)算:
 
單位=微摩爾 NADH/分鐘七、抑制劑篩選
 
1.在 96 孔酶標(biāo)板上做好相應(yīng)標(biāo)記:背景、完全活性和待測(cè)抑制劑樣品
2.按下表加入試劑
 
內(nèi)容物樣本背景完全酶活性待測(cè)抑制劑酶活性
 緩沖液
(Reagent C)微升微升微升
 陰性液
(Reagent G)微升————
待測(cè)抑制劑微升――微升
用戶自備的純化酶——微升(1 毫單位)微升(1 毫單位)
96 孔板每孔總量樣本背景孔
(  微升)完全活性孔
(  微升)待測(cè)抑制劑樣品孔
( 微升)
 
3.輕輕搖動(dòng)酶標(biāo)板,混勻
4.放進(jìn) 30℃培養(yǎng)箱里靜置 30 分鐘
5.分別加入微升  酶促液(Reagent D)
6.分別加入微升  反應(yīng)液(Reagent E)
7.分別加入微升  底物液(Reagent F)
8.輕輕搖動(dòng)酶標(biāo)板
9.即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀檢測(cè):獲得初始吸光讀數(shù)(OD) 10.放進(jìn)    30℃培養(yǎng)箱里孵育    30        分鐘11.即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀檢測(cè):獲得終點(diǎn)吸光讀數(shù)(OD)
12.實(shí)際吸光讀數(shù):初始吸光讀數(shù)(OD)—終點(diǎn)吸光讀數(shù)(OD)
13.抑制活性計(jì)算:
1)
2)IC50:50%抑制率所需的抑制劑濃度
 
3) 直接構(gòu)建抑制曲線:縱座標(biāo)(Y 軸)為吸光讀數(shù) OD;橫座標(biāo)(X 軸)為已知抑制劑濃度
 
注意事項(xiàng)
 
1.本產(chǎn)品為 25 次操作,包括背景操作
2.操作時(shí),須戴手套
3.系統(tǒng)操作過(guò)程中,背景測(cè)定只需 1 次
4.樣品處理忌用磷酸緩沖溶液
5.樣品須澄清,至關(guān)重要
6.加入  底物液(Reagent F)后 3 秒內(nèi)即刻比色測(cè)定
7.測(cè)定值由高到低變化;測(cè)定可持續(xù) 30 分鐘
8.比色測(cè)定后,比色皿須清洗徹底
9.樣本測(cè)定 0 分鐘讀數(shù)高于 5 分鐘讀數(shù)表明具有酶活性
10.建議待測(cè)樣本蛋白濃度為 50 微克/5 微升(本公司提供  Bradford 蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-
GMS30030.1)
11.如果待測(cè)樣品濃度過(guò)高或過(guò)低,可以調(diào)整樣品濃度
12.可以使用 AMPK 抑制劑(DORSOMORPHIN)作為抑制劑對(duì)照或陰性對(duì)照
13.5’AMP 活化蛋白激酶活性單位濃度定義:在 30℃溫度下,pH 7.5 條件下,每分鐘內(nèi)能夠氧化 1 微摩爾還原型煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH)所需的酶量作為一個(gè)活性單位
14.本公司提供系列蛋白激酶檢測(cè)試劑產(chǎn)品
 
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
 
1.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2.本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感
 
 組織AMPK 激酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒使用承諾
 
秉著“信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾”的宗旨為我們的用戶提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后, 應(yīng)按照產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定,保證說(shuō)明書(shū)所述的使用效果。在貨到后 10 天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問(wèn)題,請(qǐng)立即以書(shū)面形式(實(shí)驗(yàn)報(bào)告) 與本公司聯(lián)系,并將該產(chǎn)品退回,經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致,本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致,本公司不承擔(dān)由此造成的損失。

原創(chuàng)作者:青島捷世康生物科技有限公司

標(biāo)簽:組織AMPK激酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒 AMPK激酶活性試劑盒 

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產(chǎn)品訂購(gòu)說(shuō)明:
  1、報(bào)價(jià)含普票、運(yùn)費(fèi)。
  2、常用試劑備貨充足,除對(duì)溫度要求極其嚴(yán)格的產(chǎn)品當(dāng)天可發(fā)貨。
  3、進(jìn)口原裝產(chǎn)品要3-6周的貨期,詳細(xì)情況請(qǐng)咨詢客服。
  4、訂貨時(shí)間為工作日每周一至周五16:00之前。
  5、如需代為檢測(cè),標(biāo)本對(duì)環(huán)境溫度高,可聯(lián)系客服安排專人取樣(限省內(nèi)客
       戶)。

  6、代測(cè)免收代測(cè)費(fèi),一周出結(jié)果。
    7、產(chǎn)品因運(yùn)輸途中包裝破損請(qǐng)拒絕簽收,做退回。我們將在24小時(shí)之內(nèi)為您補(bǔ)發(fā)
       損壞產(chǎn)品。
    8、如因單位財(cái)務(wù)制度原因,可申請(qǐng)先發(fā)貨,報(bào)賬后付款(此條款僅限醫(yī)院、學(xué)校
       信譽(yù)良好客戶)。
   

      為方便廣大客戶辦理貨款我公司提供多個(gè)銀行的賬戶,學(xué)校、醫(yī)院客戶購(gòu)買產(chǎn)品如因單位財(cái)務(wù)制度原因可先發(fā)貨待報(bào)賬后匯款,請(qǐng)及時(shí)告知銷售人員已做具體操作。

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